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分選型流式細胞儀

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普瑞麥迪（北京）實驗室技術有限公司

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產(chǎn)品簡介

日本On-chip無損傷分選無污染分選

詳細介紹

產(chǎn)品描述

傳統(tǒng)的細胞分選通過Jet-in-Air方式高速分離細胞，但會對細胞產(chǎn)生一定的損害，對研究細胞原本的性能及特性造成很大的不便。例如，在干細胞和神經(jīng)細胞的研究中，分選后得到的細胞無法進行培養(yǎng)的案例時有發(fā)生。

日本On-chip生物技術有限公司針對以往傳統(tǒng)流式分選的弊端，于2012年推出了一款對細胞無損傷，確保臨床應用的無污染，可以無菌處理操作的流式細胞儀（On-Chip Sort）。這款小型的儀器使用微流控芯片模塊，利用空氣壓力控制，對模塊內的樣品流進行細胞分離，最多配置3激光6熒光。以低壓對細胞進行分選，從而實現(xiàn)無損傷分離。對于易損傷的神經(jīng)細胞，在使用此裝置進行分選以后，仍然可以充分保持分化功能。另外，由于使用一次性交換型模塊，各個樣品間保證無污染，也無需清洗流路通道，即使長時間不使用的狀態(tài)，只要拿一個新的篩選模塊，就立即可以開始使用，簡單方便。

其創(chuàng)新性和實用性On-chip Sort在2013年10月獲得了東京都創(chuàng)新技術優(yōu)勝獎。

產(chǎn)品特點

使用一次性交換型微流控芯片模塊分選

分選時對鞘液沒有要求（可使用海水、培養(yǎng)液等）

對細胞進行無損傷分選

無污染分選（可放置在生物安全柜中）

最多可配置3激光6熒光（405nm,488nm,561nm,637nm,785nm）

操作簡單，免校正光路和液流

易維護，無需清洗保養(yǎng)

從On-chip Flow(分析型)可直接升級為On-chip Sort(分選型）

產(chǎn)品參數(shù)

	On-chip Flow	On-chip Sort
光學系統(tǒng)
激光器	最多配置3激光（405nm、488nm、561nm、637nm、785nm）
檢測參數(shù)	前向散射光（FSC），側向散射光（SSC），6PMT（最多10參數(shù)）
檢測靈敏度	FSC < 0.5um，SSC < 1.0um
熒光靈敏度	< 200 MESF FITC
數(shù)據(jù)分析	4個動態(tài)范圍，18bit
脈沖分析	高度、面積、寬度
檢測波長	FL1(445/20nm), FL2(543/22nm), FL3(591.5/43nm) FL4(607/24nm), FL5(676/37nm), FL6( >710nm)
液流系統(tǒng)
流動室芯片	可更換的微流控芯片
芯片材料	丙烯酸樹脂
液流通道大小	80μm × 50μm	80μm × 80μm
流速	500~2000 mm/sec	500mm/sec
鞘液	含有FBS的培養(yǎng)基也可
樣品體積	10~300ul	10~100ul
鞘液體積	1~3ml
分析和分選
分選方法	—	模塊內流體推送方式
純度	—	>95%（取決于細胞濃度）
得率	—	>80%
細胞損傷	無	無
交叉污染	無
是否無菌	無
壓力	0.3~3PSI	0.3PSI
檢測速度	4000 events/sec
分選速度	—	20targets/s
開機	幾分鐘	5min
關機	10s （清洗不是必要程序）
安全性
氣溶膠產(chǎn)生	無
大小和重量
大小 (WHW，mm）	520330390	620330390
重量（kg)	35kg	45kg
PC和軟件
PC	筆記本
OS	Windows7,64bit
數(shù)據(jù)格式	自有格式以及FCS 3.0

應用領域

包括，但不限于血液中的癌細胞CTC，神經(jīng)細胞，細菌的存活數(shù)量，微生物，霉菌，精子，蛋白質，淋巴腺，系統(tǒng)單元（乳齒的齒髓)，再生細胞(iPS　ES細胞）。

※獲得諾貝爾醫(yī)學獎的京都大學iPS研究院等多數(shù)客戶在使用

1. 神經(jīng)干細胞無損傷分選培養(yǎng)再驗證對比

傳統(tǒng)分選與on-chip分選的神經(jīng)細胞，經(jīng)過7天的培養(yǎng)對比觀察，on-chip分選出的神經(jīng)細胞的生理特性與未分選之前保持高度一致。

2. 牙髓干細胞無損傷分選

來源于退出齒的牙髓（DPSC），牙周韌帶（PDLSC），牙囊（DFSC），和根尖乳頭（APSC），比骨髓干細胞（BMSC）的四種間充質干細胞，相對于骨髓干細胞來說具有更強的增殖能力和多能干性，因此是一種被證明的更適于再生醫(yī)學的干細胞，通過On-chip sort分選儀獲取來源于硬組織的細胞，之后移植了從撤出齒與骨髓來源的人類間質干細胞的四種干細胞。所得到的細胞仍然保持干細胞的特性，驗證了on-chip對干細胞無損傷分選的應用。

3. 無以倫比的循環(huán)腫瘤細胞 CTC精確分選

On-chip分選儀因其的性能，可被用于細胞治療及細胞診斷，能夠精確檢測和分離循環(huán)腫瘤細胞；用on-chip對各種癌癥病人超低量血液中的CTC進行分離，分選后的細胞可用于培養(yǎng)跟蹤及優(yōu)化選擇的藥物和分析基因變異，區(qū)別于CellSearch，isoflux等分選方式，On-chip采用CD45^-陰性排除法，不依賴于EpCAM，綜合CK標記，對 KATO-III,A549,PC-14類CTC識別及捕獲，準確率分別高達93.8±5.5%，82.4±8.5%，96.0±8.5%，相對Cellsearch的74.7%，28.8%0.0%，on-chip的無損分選技術對CTC的分選精確度有了質飛躍性。

4. 精子分選無損傷分選

用常規(guī)的流式細胞儀檢測，在通過噴嘴時，精子的尾巴易纏繞，無法達到單細胞檢測；而且溫度的變化，精子易失活；分選時，精子頭和尾方向不一致，有可能無法包裹在同一個液滴中，電荷分選受影響較大。On-chip無損傷分選技術，采用微流控低壓分選，可精確無損傷分選活性精子。

精子經(jīng)PI(只能染死細胞）和SYTO9（可以染活細胞和死細胞）染色后分選。分選活的精子（PI-SYTO9+）可在收集槽中觀測。

5. 血細胞分選----形態(tài)保存完好比較

On-chip分選出的粒細胞相對傳統(tǒng)分選方式，細胞形態(tài)保留完好，進一步證實On-chip的在血細胞臨床領域的無損傷分選的可靠性。

6. 高鹽濃度培養(yǎng)的牡蠣派琴蟲分選

牡蠣派琴蟲適合在高鹽濃度下生存，改變環(huán)境，活性大受影響，利用On-chip無損分選技術及多種鞘液可選的特性，對比原始培養(yǎng)液及PBS做鞘液分選結果，培養(yǎng)后1h用PI染色做活性鑒定，結果顯示原始培養(yǎng)液分選獲得細胞無損傷，而PBS分選活性極大降低。驗證了on-chip在海洋及水質監(jiān)測領域的應用。

Collaboration with Dr. Hirokazu SAKAMOTO, the Univ. of Tokyo

7. 酵母細胞的活/死細胞進行鑒定和分選

酵母細胞以不同的加熱時間進行處理，經(jīng)SYTO-9和PI染色后，在on-ship sort上檢測與分選，On-chip Sort 能夠清楚的識別活細胞和死細胞群；對經(jīng)加熱處理40min的細胞樣品分選活和死的細胞群，并且在培養(yǎng)皿中進行培養(yǎng)。死細胞沒有長出克隆，而活細胞長出了40個克隆。充分證實了On-chip Sort分選的準確性。

應用舉例

1 分選老鼠的胎兒腦部海馬神經(jīng)細胞

使用傳統(tǒng)的流式細胞儀和On-chip Sort對分選前后的細胞進行培養(yǎng)，分選后使用PI染色發(fā)現(xiàn)細胞沒有什明顯差別，但3天后細胞的分化增值出現(xiàn)差異化。

圖1 神經(jīng)細胞的無損傷分選

傳統(tǒng)的流式細胞儀分選的細胞在后續(xù)培養(yǎng)中沒有形成軸突，Onchip Sort處理過的細胞和未做分選處理的細胞一樣形成軸突。

本研究是和東京工科大學的鈴木郁郎先生共同研究的成果。

2 精子分選

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